Холинэстераза

Audit Diagnostics – европейская надежность и качество химических реактивов для лабораторий различного профиля с 1993 года.

ХОЛИНЭСТЕРАЗА

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат.№.	Количество	Реагент	Хранение
AD1001CS	4 x 40мл	Холинэстераза - 1	2-8°C
	4 x1 0мл	Холинэстераза - 2	2-8°C

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения холинэстеразы в сыворотке и плазме на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Два родственных энзима способны расщепить ацетилхолин. Один из ферментов называется холинэстераза или холинэстераза I, другой – псевдохолинэстераза или холинэстераза II. Холинэстераза I отвечает за быстрый гидролиз ацетилхолина в нервных окончаниях с промежуточной трансмиссией нейрального импульса через синапсис. Измерение уровня холинэстеразы необходимо при:

Возможной инсектицидной интоксикации.
Определении атипических форм фермента.
Выполнении печеночных проб.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Холинэстераза катализирует расщепление бутирилтиохолина в тиохолин и бутират в присутствии гексацианоферрат калия (III) (желтого цвета). Гексацианоферрат калия (III) превращается в гексацианоферрат калия (II) – бесцветный. Абсорбция в образце снижается пропорционально активности холинэстеразы.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики.

Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить показания анализа.

Цвет и вид компонентов:

Реагент 1: прозрачная светло-желтая жидкость

Реагент 2: прозрачный бесцветный жидкость

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:

В соответствии с европейскими стандартами продукт не представляет опасности. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности:

Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
Храните в защищенном от солнечных лучей месте, избегайте загрязнения и испарения реагента.
Закупорьте флакон сразу же после использования и храните при t 2-80С.
Не замораживайте реагенты.
Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

СОСТАВ НАБОРА:

Компоненты	Ингредиенты	Концентрация
Реагент 1	Пирофосфатный буфер pH 7.7	65.0 ммоль/л
Реагент 1	Гексацианоферрат (III)	2.0 ммоль/л
Реагент 2	Goods буфер pH 4.0	20.0 ммоль/л
Реагент 2	Бутирилтиохолин йодид	65.0 ммоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом.

При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

Монореагентная методика: смешайте 1 мл Реагента 2 с 4 мл Реагента 1. При температуре 2-8°C рабочий реагент стабилен 30 дней.

Биреагентная методика: жидкие Реагенты 1и 2 готовы для использования.

После вскрытия, при правильном хранении, компоненты остаются стабильными до окончания срока годности.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку, свободную от гемолиза, гепарин/EDTA плазму. НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ цитратную, оксалатную и фторидную плазму. При работе с образцами рекомендуется придерживаться требований NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец должен набираться только в специально предназначенный для этого контейнер. Сыворотку/плазму необходимо отделить от клеток крови немедленно после забора крови.

Стабильность: до 15 дней при 2-8°C.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание	Кат. №	Описание	Кат. №
Калибратор	AD983	Фотометр	нет
Универсальные контрольные сыворотки Уровень 1	AD922	Общее лабораторное оборудование	нет
Универсальные контрольные сыворотки Уровень 2	AD932	Соляной раствор 0.9 г/л NaCl		нет

Процедура определения:

Длина волны: λ = 405 (400 - 440) нм

Температура: 37°C

Оптический путь: 1 см

Реакция: «Кинетическая» (убывающая)

Перед использованием нагрейте реагент до 15-250С. Объемы могут пропорционально измениться.

Монореагентная методика «стартовый образец»	Бланк	Образец
Рабочий реагент	1000 µл	1000 µл
Дистиллированная вода	15 µл	-----
Образец	-----	15µл
Аккуратно смешайте инкубируйте1 мин. при 37°C Снимите точные показания спектральной поглощательной способности бланка и образца в течение 1,2,3 минут и высчитайте среднее в минуту. Подсчитайте изменение оптической плотности в минуту (∆OD/мин).

Примечание: спектральная поглощательная способность рабочего реагента должна быть как минимум 1.000 при λ = 405 нм.

Биреагентная методика: «стартовый субстрат»	Бланк		Образец
Рабочий реагент	800µл		800µл
Дистиллированная вода	15µл		----
Образец	----		15µл
Аккуратно смешайте, инкубируйте 1 мин. при 37°C затем добавьте:
Реагент 2		200µл	200µл
Аккуратно смешайте, инкубируйте 4 мин. при 37°C. Снимите точные показания спектральной поглощательной способности бланка и образца в течение 1,2,3 минут и высчитайте среднее в минуту. Подсчитайте изменение оптического расстояния в минуту (∆OD/мин).

Калибровка:

Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор:

Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:

Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.

Контроли должны подвергаться анализу:
Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Холинэстераза [U/l] = ∆ OD/min x 62000. Коэффициент фактора и реагента до λ = 405 нм при 37°C.

(Коэффициент пересчета: μkat/l = ед/л x 0 0167).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

В сыворотке и плазме при t 37°C	ед/л	µKat/l
Взрослые мужчины	5100 – 11700	85 – 195
Взрослые женщины	4000 – 12600	69 – 210
Дети до 6месяцев	От 40% до 50% активность выше, чем у взрослых

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений.

РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: Линейность до 12000 ед/л (200 µkat/l. Соответствует ∆OD/мин - 0.200 при 405 нм).

Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl (9г/л) и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 2 раза.

Интерференция:

Желтуха: нарушение менее 10% при показателях билирубина (и фракций) до 600 µмоль/л.

Липемия: нарушение менее 10% при показателях интралипидов до 5 г/л.

Чувствительность: 43 ед/л (0.05 µkat/l).

Точность:

Внутрисерийная N = 30	Среднее значение (ед/л)	SD	% CV	Межсерийная N = 15 (3 дня)	Среднее значение (ед/л)	SD	% CV
Уровень 1	3709.00	65.67	1.77	Уровень 1	3691.91	76.76	2.08
Уровень 2	7487.07	65.49	0.87	Уровень 2	7455.38	68.41	0.92