Креатинкиназа (CK-NAC)

печать

Audit Diagnostics – европейская надежность и качество химических реактивов для лабораторий различного профиля с 1993 года.

КРЕАТИНКИНАЗА (CK-NAC).

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ.

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат. №. Количество Реагент Хранение
AD804CK 10 x 15 мл 2 x 15 мл 1 x 2 мл КРЕАТИНКИНАЗА NAC - 1 КРЕАТИНКИНАЗА NAC - 2 2-8°C
AD814CK 5 x 50 мл 1 x 50 мл КРЕАТИНКИНАЗА NAC - 1 КРЕАТИНКИНАЗА NAC - 2 2-8°C

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения креатинкиназы (CK- NAC) в сыворотке и плазме рекомендованного Международной организацией клинической химии (IFCC) на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Реагент СК – это фермент, имеющий 4 различные формы: митохондральный изофермент и 3 цитоплазматических изофермента: CK MM – мышечный, CK BB –мозговой, CK MB – сердечный. Активность сыворотки крови может быть следствием повреждения сердечной мышцы или скелетной мускулатуры, при нарушениях ЦНС, гипотиреозе, ранней диагностике инфаркта миокарда, когда увеличение изоэнзима наблюдается уже через 3-8 часов после острого приступа.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Креатинкиназа активируется N-ацетилцистеином. В начальной реакции ативированная креатикиназа катализирует дефосфорилирование креатинфосфата. В совместно идущей реакции, катализируемой гексокиназой, глюкоза фосфорилируется АТФ, выделившимся в первой реакции с образованием глюкозо-6-фосфата. В конечной реакции глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа катализирует окисление глюкозо-6-фосфата окисленным НАДФ+ с образованием 6-фосфоглюконата и восстановленным НАДФН. Скорость образования НАДФН прямо пропорциональна активности креатинкиназы.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики.

Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить показания анализа.

Цвет и вид компонентов:

Реагент 1: прозрачная бесцветная жидкость

Реагент 2: прозрачная светло-желтая жидкость

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности: В соответствии с европейскими стандартами продукт не представляет опасности. Данные реагенты содержат азид натрия. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности:

  1. Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указана на флаконе.
  2. Не замораживайте реагенты.
  3. Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
  4. Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
  5. Следуйте требованиям по утилизации продукта.

ОБОРУДОВАНИЕ:

Описание по использованию оборудования предоставляется по запросу.

Компоненты Ингредиенты Концентрация
Реагент 1 Имидазоловый буфер pH 6.7 100 ммоль/л
Глюкоза 20 ммоль/л
Ацетат магния 10 ммоль/л
Реагент 1 (condt) ЭДТА 2.0 ммоль/л
АДФ 2.0 ммоль/л
АМФ 5.0 ммоль/л
НАДФ 2.0 ммоль/л
Гексокиназа > 2.5 U/мл
N- ацетилцистеин 20 ммоль/л
Реагент 2 Креатинфосфат 30 ммоль/л
Глюкоза-6-фосфатдегидрогиназа > 1.5 ед/мл
Диаденозин-пентафосфат 10 µмоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ: Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом. При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

Монореагентная методика: смешайте 1 часть Реагента 2 с 5 частями Реагента 1. При температуре 2-8°C рабочий реагент стабилен 20 дней.

Биреагентная методика: жидкие Реагенты 1и 2 готовы для использования.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку, свободную от гемолиза. При работе с образцами рекомендуется придерживаться требований NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец должен набираться только в специально предназначенный для этого контейнер. Сыворотку/плазму необходимо отделить от клеток крови немедленно после забора крови, хранить в темном месте. Стабильность образца: до 7 дней при t 4°C в темном месте и плотно закрытой крышкой.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание Кат. № Описание Кат. №
Калибратор AD983 Фотометр нет
Универсальный контрольная сыворотка Уровень 1 AD922 Общее лабораторное оборудование нет
Универсальный контрольная сыворотка Уровень 2 AD932

Процедура определения:

Длина волны: λ 340 (334/365) нм

Температура: 300C (25°C или 37°C)

Длина оптического пути: 1 см.

Монореагентная методика Бланк Калибратор Образец
Рабочий реагент 1000 μл 1000 μл 1000 μл
Образец ---- ---- 40 μл
Калибратор ---- 40 μл ----
Аккуратно смешайте, инкубируйте 2 мин. при 30°C (37°C). Измеряйте оптическую плотность каждую минуту в течение 3 минут и высчитайте среднее значение в минуту (∆OD/мин).

Для расчета активности фермента:

340 нм: Ед/л= ∆ OD//мин x 4127

334 нм: Ед/л= ∆ OD//мин x 4207

365 нм: Ед/л= ∆ OD//мин x 7429

Биреагентная методика: Контрольная проба Калибратор Образец
Реагент 1 1000 μл 1000 μл 1000 μл
Образец ---- ---- 40 μл
Калибратор ---- 40 μл ----
Аккуратно смешайте и инкубируйте 5 мин. при 37°C
Реагент 2 200 μл 200 μл 200 μл
Аккуратно смешайте и инкубируйте 2 мин. при 37°C В течение следующих 4 минут измеряйте оптическую плотность с интервалом в минуту (∆OD/мин). Высчитайте среднее значение

Расчет по фактору:

340 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 4911

334 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 5006

365 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 8840

*Вышеуказанный фактор указан в инструкции к калибратору (AD973).

Калибровка:Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор:

  1. Используете новый комплект реагентов или меняете номер партии
  2. Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
  3. Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:

Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.

Контроли должны подвергаться анализу:

  1. Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
  2. Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
  3. В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

340 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 4127

334 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 4207

365 нм: Ед/л= ∆ OD /мин x 7429 (Коэффициент пересчета: μkat/l = Ед/лx 0 0167).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

Инфаркт миокарда: вероятность инфаркта в 3 случаях:

ед/л при 25°C2 µkat/l при 25°C ед/л при 30°C3 µkat/l при 30°C ед/л при 37°C* µkat/l при 37°C
1. CK мужчины > 80 > 1.33 > 130 > 2.17 >190 > 3.17
женщины > 70 > 1.17 > 110 > 1.83 > 167 > 2.87
2. CK- MB > 10 > 0.17 > 15 > 0.25 > 24 > 0.40
3. Активность CK-MB до 6 – 25% от общей активности CK1

* Температурный коэффициент пересчета от: 25°C до 30°C - 1.53; от 25°C до 37°C - 2.38.

Каждая лаборатория должна установить свою собственную нормированную область значений.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: Линейность до 1806 ед/л (30 µkat/l). Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:1 с 0.9% NaCl и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 2 раза.

Интерференция:

Желтуха: нарушение менее 10% при показателях билирубина (и фракций) до 400 µмоль/л.

Гемолиз: нарушение менее 10% при показателях гемоглобина до 1.25 г/л.

Липемия: нарушение менее 10% при показателях триглицеридов до 2.5 г/л.

Чувствительность: 5 ЕД/Л(0.42 µkat/l).

Точность:

Внутрисерийная N = 20 Среднее значение (ед/л) SD %CV Межсерийная N = 20 Среднее значение (ед/л) SD % CV
Уровень 1 177 2.5 1.41 Уровень 1 169 1.50 0.89
Уровень 2 408 3.43 0.84 Уровень 2 383 1.29 0.34

Метод сравнения: Сравнение 50 образцов с использованием этих реагентов креатинкиназы (y) и другими доступными реагентами (x), дают следующие результаты.

y = 0.997x + 5.765 r = 0.986 Ранг образца: от 9 до 395 ед/л