Липаза

Audit Diagnostics – европейская надежность и качество химических реактивов для лабораторий различного профиля с 1993 года.

ЛИПАЗА

УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ЖИДКИЙ РЕАГЕНТ

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:

Кат. №.	Количество	Реагент	Хранение
AD537L	4 x 10 мл	ЛИПАЗА - 1	2-8°C
AD537L	1 x 8 мл	ЛИПАЗА - 2	2-8°C

ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ:

In Vitro диагностике данный набор реагентов используется для количественного определения липазы в сыворотке и плазме человека на автоматических и полуавтоматических анализаторах.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ:

Липаза – фермент катализирующий расщепление триглицеридов на глицерин и высшее жирные кислоты. Этот энзим в организме человека вырабатывается рядом органов и тканей, что позволяет различать липазу желудочного происхождения, поджелудочной железы, липазу легких и т.д. Наиболее важной с клинической точки зрения является липаза поджелудочной железы. Она играет главную роль в переваривании жиров. Определение активности липазы в крови – наиболее информативный критерий диагностик острого панкреатита. Содержание липазы увеличивается и снижается параллельно повышению и снижению активности α-амилазы, но нормализация ее уровня происходит позже нормализации амилазы. Иногда уровень липазы в крови повышается раньше, чем увеличивается активность амилазы и остается повышенным длительное время. При остром панкреатите активность липазы в крови увеличивается в течение 4-8 часов после острого приступа, достигая максимума через 24 часа, снижение наблюдается через 8-14 дней.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Метод базируется на гидролизе специфического хромогенного субстрата липазы 1,2-O-дилаурил-рэк-глицеро-3-глютаровая кислота-(6-метил-ресоруфин) эстер, эмульгированного желчными кислотами. Активность энзима определяется взаимодействием желчной кислоты и колипазы. Фактически активность липазы не определяется без колипазы, которая активирует липазу панкреатической железы, не влияя на активность других энзимов в сыворотке крови. Высокое содержание холатов препятствует взаимодействию эстеразы с хромогенами, что приводит к повышению поверхностного отрицательного заряда. Измерение активности панкреатичекой липазы базируется на кинетическом колометрическом методе. Серия реакций, используемая в данном методе, является прямым энзиматическим прямым определением липазы. Уровень образования метилресоруфина, измеряется фотометрически, и пропорционален активности липазы в образце.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:

Реагенты можно использовать только профессионально для лабораторной диагностики. Внимательно прочитайте инструкцию по работе с реагентами. Отклонения от порядка выполнения процедуры могут изменить порядок выполнения анализа.

Цвет и вид компонентов:
Реагент 1: Прозрачная бесцветная жидкость.
Реагент 2: Мутная оранжевая микро-эмульсия. Если Реагент 2 стал красного цвета, он не пригоден для использования.

Любые незначительные изменения цвета могут означать, что анализ, возможно, выполнен некорректно. В этом случае обратитесь к программе лабораторного контроля качества. В случае серьезных повреждений флакона и/или крышки, результатом чего стала утечка и/или загрязнение реагента, не используйте комплект и обратитесь к дистрибьютору.

Меры безопасности:
Внимание: придерживайтесь всех необходимых мер безопасности при работе с реагетами в лаборатории. Техническая информация безопасности материалов предоставляется по запросу.

Меры предосторожности при использовании:

Не используйте просроченные реагенты, дата пригодности указанна на флаконе.
Не замораживайте реагенты.
Не используйте реагенты для других целей, кроме тех, которые указаны в разделе «ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ».
Не меняйте крышки флаконов между собой, это может привести к загрязнению реагентов, что, впоследствии, приведет к неправильным результатам анализа.
Следуйте требованиям по утилизации продукта.

СОСТАВ НАБОРА:

Компонент	Ингридиенты	Ингредиенты	Концентрация
Реагент 1		TRIS Буфер pH 8.3	40 ммоль/л
		Колипаза	≥ 1 мг/л
		Дезоксихолат	1.8 ммоль/л
		Тауродезоксихолат	7.2 ммоль/л
Реагент 2		Тартрат pH 4.0	15 ммоль/л
		Субстрат липазы	≥ 0.7 ммоль/л
		Хлорид кальция	0.1 ммоль/л

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ:

Реагент 1 и 2 готовы для использования. Стабильность после вскрытия 90 дней при 2-8°C с плотной закрытой крышкой.
Перед использованием аккуратно перемешайте каждый флакон с реагентом.
При правильном хранении набора, неоткрытые реагенты остаются стабильными до окончания даты пригодности, указанной на этикетке.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Как образец используйте сыворотку или гепарин-плазму.14 НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ: ЭДТА, цитрат и флюорид. В работе с образцом рекомендуется придерживаться методики работы NCCLS (или похожих условий стандартизации). Образец необходимо набрать в соответствующий контейнер, предназначенный для этого образца.
Стабильность: до 2 дней при 2-8°C.

МЕТОД КОНТРОЛЯ:

Необходимое оборудование (отсутствует в данном комплекте):

Описание	Кат. №	Описание	Кат. №
Калибратор	AD983	Спектрофотометр или фотоколориметр (с λ=580 нм)	нет
Универсальный контроль Уровень 1	AD922
Универсальный контроль Уровень 2	AD932

Процедура определения:
Длина волны: λ 578 нм
Температура: 37°C
Оптический путь: 1 см

		Бланк	Калибратор	Образец
Реагнет 1		1000 µл	1000 µл	1000 µл
Образец		----	----	10 µл
Калибратор		----	10 µл	----
	Аккуратно перемешайте и инкубируйте 3 мин. 37°C.
Реагент 2	200 µл 200 µл 200 µл
	Аккуратно перемешайте и инкубируйте при 37°C. Измеряйте оптическую плотность (OD) через 2мин. по бланку. Считайте ∆ Аbs против калибратора, бланка и образца в мин.

Калибровка:

Используя рекомендуемый калибратор, откалибруйте прибор перед использованием:

Используете новый набор или меняете номер партии реагентов.
Производите профилактическое обслуживание или меняете неисправные детали фотометра.
Контроли качества за пределами допустимой нормы.

Контроль качества:

Все клинические лаборатории должны установить программу внутреннего контроля качества. Проводить проверку аппаратуры и реагентов при помощи рекомендуемого или схожего контроля. Оценка, полученная для контроля качества, должна соответствовать допустимым пределам производителя или должна быть установлена в соответствии с программой лабораторного контроля качества.
Контроли должны подвергаться анализу:

Когда получен предварительный отчет о результатах пациента.
Когда производится профилактическое облуживание фотометра.
В интервалах установленных программой лабораторного контроля качества.

РАСЧЕТЫ:

Концентрация липазы = ∆ Аbs образца / ∆ Аbs калибратора x концентрация калибратора

(Коэффициент пересчета: µkat/l = U/l х 0.017).

ГРАНИЦЫ НОРМЫ:

	U/l	µkat/l
Взрослые	5.6-51.3	0.51-3.57

Эти значения должны использоваться как базовые. Полученные результаты всегда необходимо сравнивать с результатами анализов пациента и его историей болезни.

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:

Рабочие характеристики могут меняться в зависимости от используемой аппаратуры. Полученные данные в разных лабораториях могут отличаться от результатов, полученных в своей лаборатории.

Линейность: до 250 U/l.
Для образцов с большей концентрацией, разведите: 1:10 с 0.9% NaCl (9г/л) и еще раз подвергните анализу. Результат увеличить в 10 раз.

Интерференция:

Желтуха: отсутствует при показателях билирубина до 20 мг/дл.
Гемолиз: отсутствует при показателях гемоглобина до 150 мг/дл.
Липемия: нарушение менее 10% при показателях триглицеридов до 300 мг/дл.

Чувствительность: нижний предел обнаружения 5 U/l.

Точность:

Внутрисерийная N = 21	Среднее значение (U/l)	SD	%CV	Межсерийная N = 11	Среднее значение (U/l)	SD	% CV
Уровень 1	119	4.13	3.34	Уровень 1	119	5.43	4.54
Уровень 2	215	5.97	2.78	Уровень 2	215	10.7	5.02

Метод сравнения:
Сравнение 100 образцов с использованием этих реагентов липазы (y) и другими доступными реагентами (x), дают следующие результаты.

y = 0.50054x + 3.9443

r = 0.997