Образование тромба начинается под воздействием тромбина, фибриноген превращается в фибрин, который образует основу сгустка крови.
Процесс данного превращения многостадийный и сложный. Молекула фибриногена превращается в молекулу фибрина, которая способна к полимеризации и образованию нерастворимого сгустка. Данная реакция сопровождается отщеплением фибринопептидов А и В. Фибрин служит, также, основой для плазмина – основного фермента фибринолиза. Плазмин вызывает расщепление фибриногена и фибрина. Образующиеся вследствии этой реакции молекулы обозначаются как результат деградации фибрина/фибриногена - Д-димеры и тримеры
При ряде паталогий, характеризующихся активацией свертывания крови, происходит постоянный процесс трансформации фибриногена в фибрин с появлением в кровотоке избытка фибринопептидов А и В, а также мономеров фибрина.
Активация фибринолиза сопровождается повышенным образованием Д-димеров и тримеров, которые начинают взаимодействовать с фибрином, еще не подвергнувшимися полимеризации. В результате чего образуются растворимые фибрин-мономерные комплексы.
Концентрация всех перечисленных белковых молекул отражает два процесса – тромбообразования и тромболизиса и может быть использована в клинической практике для оценки данных процессов.
Для определения Д-димеров были разработаны антитела: ДД-3В6, DD5, MA8D3, MAb 8-8G, 54H9 к эпитопам гамма-связей в Д-доменах молекул фибрина.
Указанные антитела связываются с Д-димерами, но не вступают в реакцию с фибриногеном и растворимыми фибрин-мономерами. Определение Д-димера таким методом показывает, что при фибринолизе расщепляется именно фибрин, а не фибриноген и фибрин-мономеры.
При этом на определение Д-димера не оказывают влияния техника забора крови, примесь тромбоцитов, не требуется использование ингибиторов.
Концентрация Д-димера пропорциональна активности фибринолиза и количеству лизируемого фибрина. Д-димеры долго циркулируют в крови. Время полувыведения составляет более 24 ч. Повышенная концентрация сохраняется в течение нескольких недель после острого тромбоза.
Клиническое значение Д-димера велико в таких областях как акушерство/гинекология, онкология, предупреждение тромбоэмболии, мониторинг антикоагуляционной терапии, при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.
Методы определения Д-димера:
Иммунно – ферментный анализ для измерения концентрации Д-димера показало высокую затратность единичных исследований. Кроме того, ИФА длителен и проводится на серии образцов.
Методы, основанные на иммунодиффузии на порозных мембранах, позволяют работать с единичными образцами и получать результат в течение 15 мин. Однако данные тесты достаточно привередливы: требуют решения вопросов о калибровке и проведении контроля качества.
Среди методов определения концентрации Д-димера широкое распространение получила технология микролатексной агглютинации с фотометрической регистрацией реакции. Суть метода основывается в увеличении оптической плотности реагента при добавлении плазмы пациента. При этом измеряемое увеличение плотности пропорционально концентрации Д-димера в образце.
Иммунотурбидиметрический метод легко автоматизируется и данная функция реализована у части автоматических биохимических анализаторов. Определение концентрации Д-димера обычно проводится в комплексе с другими показателями системы гемостаза, для этих целей требуются коагулометры с оптическим способом регистрации. Именно такие модели приборов имеют специальную схему измерения оптической плотности.
При помощи программного обеспечения коагулометра проводится построение калибровочного графика, расчет, а также внутрилабораторный контроль качества.
Правильный выбор лабораторного оборудования (коагулометр) с качественной оптикой позволит выполнять оценку концентрации Д-димера с высокой точностью, методически просто и быстро.
При выборе реагентов для определения концентрации Д-димера необходимо учитывать стабильность после вскрытия, наличие калибровочного и контрольного материалов, удобство в использовании, специфичность и чувствительность теста, пределы линейности измерений.